Приготовление чашек при методе диффузии в агар



Приготовление чашек

Расплавленную агаризованную среду (бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120—140 мг% аминного азота — 1000 мл; агар-агар «тафуинский» —15 г, натрия фосфат двузамещенный — 3 г, рН после стерилизации 7,0—7,2) разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм, расположенные на горизонтальной поверхности. Перед заражением поверхность застывшей среды подсушивают в течение 30—40 мин при комнатной температуре с приоткрытыми крышками. Готовые чашки можно хранить при 10° С не более 7 дней, перед употреблением их необходимо подсушить.

Выбор питательной среды является одной из наиболее важных проблем при определении чувствительности микробов к антибиотикам, поскольку се состав существенно отражается на результатах исследования. Трудно поддаются стандартизации такие компоненты питательных сред, как пептоны, мясной гидролизат, агар-агар. На результаты определения чувствительности к некоторым антибиотикам, таким, как аминогликозиды, тетрациклины, полимиксин, оказывают существенное влияние ионы двухвалентных металлов, содержание которых в среде поэтому ограничивается (ионов Са++ до 100 мг/л, Mg++ до 35 мг/л среды). В связи с тем что двухвалентные ионы Са++ и Mg++ вносятся в среду в основном в составе агар-агара, рекомендуется использовать агар-агар определенных марок — фирмы «Дифко» или «тафуинский».

Среды, приготовленные с применением указанных агар-агаров, наиболее удовлетворяют требованиям ВОЗ по содержанию в них ионов двухвалентных металлов.

Приготовление посевного материала и заражение чашек

Определение чувствительности проводят с чистыми культурами бактерий. Однако в ряде случаев с целью быстрого получения ориентировочных данных 0 чувствительности микроорганизмов для исследования используют непосредственно патологический материал. Плотные субстраты (мокрота, кал, гной и др.) тщательно растирают; жидкости (моча, экссудат и пр.) центрифугируют и исследуют осадок. Материал наносят на поверхность среды с помощью ватного тампона или петли.

После выделения чистой культуры исследование повторяют. Для приготовления инокулюма культуру бактерий (5—10 однородных колоний) суспендируют в 2 мл жидкой среды (бульон Хоттингера с содержанием 120—140 мг% аминного азота, рН 7,0—7,2, или мясопептонный бульон, рН 7,0—7,2). Плотность суспензии должна соответствовать стандарту мутности № 10.

Бактериальную взвесь в количестве 1 мл наливают на поверхность среды и равномерно распределяют путем покачивания чашки. Избыток жидкости удаляют пипеткой, затем чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 30—40 мин.


«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина

Смотрите также на тему: