Определение концентрации антибиотиков в тканях органов



Для определения концентрации антибиотиков в тканях органы после удаления остатков крови взвешивают и гомогенизируют путем растирания с кварцевым песком или в специальном смесителе. К гомогенату добавляют дистиллированную воду или соответствующий буфер. Полученную взвесь центрифугируют 30 мин при 2500—3000 об/мин. Концентрацию антибиотика определяют в надосадочной жидкости.

Для получения воспроизводимых результатов необходима строгая стандартизация опытов. Скорость диффузии растворов в агар зависит от химической природы антибиотиков, состава и рН агаровой среды, буфера, в котором готовят рабочие растворы стандарта и испытуемого материала, температуры и времени инкубации. Поэтому при определении концентрации антибиотиков в испытуемых субстратах подбирают условия для культивирования тест-культуры, оптимальные по составу и рН питательные среды, буферные растворы, обеспечивающие максимальную диффузию растворов антибиотика в среду и четкость очертания зон. Определение проводят по схеме, общей для всех антибиотиков, которая состоит из нескольких этапов1.

Подготовка чашек со средами и тест-микробом

Определение концентрации антибиотиков в биологических субстратах или активности препаратов антибиотиков можно проводить на двух или одном слое питательной среды, разлитой в чашки Петри. Для нижнего слоя используют «голодные» незасеянные среды, для верхнего или одного слоя агаризованную среду засевают соответствующим тест-микробом. Обычно используют питательные среды, приготовленные на бульоне Хоттингера. Каждому антибиотику соответствует среда с определенным содержанием аминного азота (смотрите таблицу ниже)

Среду, предназначенную для нижнего слоя, разливают в чашки Петри одинакового диаметра с ровным и плоским дном, установленные на горизонтальной поверхности, отрегулированной по ватерпасу Нижний слой можно разливать заранее, сохраняя чашки при температуре 2—8° С в течение 3 — 5 сут.

Питательную среду для верхнего слоя заражают взвесью соответствующего тест-микроба (смотрите таблицу ниже) Аспорогенные культуры вносят в предварительно расплавленную и охлажденную до 48 — 50°С среду, взвесь спор — при 65 — 70°С. Наиболее удобны для определения активности антибиотиков спорообразующие микроорганизмы. Споры могут длительно сохраняться без изменения свойств (взвеси спор Bacillus mycoides и Bacillus subtilis в дистиллированной воде сохраняются до 5 лет). О способах выращивания и сохранения тест-культуры см. в Государственной фармакопее СССР (изд. X).

Смотрите таблицу — Питательные среды и тест-культуры, применяемые при определении активности антибиотиков методом диффузии в агар

1Материал изложен применительно к определению антибиотиков в тканях и жидкостях организма на основе методов контроля ВНИИА для определения ак4тивности препаратов и модифицированных в лаборатории экспериментальной химиотерапии того же тнститута.


«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина

Смотрите также на тему: