Подбор раствора стандарта антибиотика



В связи с тем что линейная зависимость между концентрацией и величиной зон задержки роста тест-микроба обнаруживается лишь в определенном интервале концентраций, растворы стандарта антибиотика должны быть точно подобраны. Для стандарта каждого антибиотика определяют концентрацию раствора, которая обеспечивает образование ж оптимальных зон задержки роста тест-культуры (контрольная концентрация). Такой концентрацией для бензилпенициллина является 1 ЕД/мл, олеандомицина — 4 мкг/мл, эритромицина—1 мкг/мл и т д. (смотрите таблицу ниже).

Смотрите таблицу — Растворы, применяемые для разведения стандартов и испытуемых образцов, условия приготовления и хранения растворов

В стандартных условиях опыта при применении контрольных концентраций величина зон подавления роста колеблется в пределах 16—18, 17—19 мм. При приготовлении растворов испытуемого материала стремятся создать концентрации антибиотика в пределах, близких контрольной концентрации стандарта.

Приготовленные разведения стандарта антибиотика и испытуемого материала вносят в стерильные цилиндрики из нержавеющей стали или алюминия, расставленные по 6 в чашке на поверхности застывшей питательной среды. Все цилиндрики должны быть одинаковой массы и размера (высота 10 мм, внутренний  диаметр 6 мм). Вместо цилиндриков испытуемые растворы можно вносить в предварительно сделанные в толще агара (пробочным сверлом) лунки диаметром 8 мм или пропитывать ими бумажные диски. При использовании дисков иногда получаются зоны неправильной велй-1 чины и формы, что связано с неравномерной диффузией антибиотика из диска.

Растворы стандарта и испытуемого образца вносят в цилиндрики или лунки специальной капельницей или пипеткой в объеме 0,1 мл, чередуя стандартный и испытуемый растворы. Для каждого испытания используют не менее 3 чашек. Чашки инкубируют при 37° С в течение 18 ч, затем цилиндрики сбрасывают и измеряют диаметры зон задержки роста тест-микроба, образуемые испытуемыми растворами.

Расчет активности испытуемого препарата

Концентрацию антибиотика в испытуемом субстрате определяют по стандартной кривой. Для построения стандартной кривой используют 5 концентраций раствора стандартного препарата. Одна из концентраций, по которой вносят поправки для всех других, является контрольной. Применяемые для построения кривой концентрации не должны отличаться от контрольной более чем в 2 раза (смотрите таблицу выше).

Для каждой концентрации, кроме контрольной, используют 3 чашки (всего 12 чашек). В 3 цилиндрика или лунки каждой чашки вносят раствор контрольной концентрации, в 3 другие — одну из взятых концентраций стандарта. После измерения зон задержки роста для каждой концентрации выводят среднюю величину зоны на 3 чашках, затем находят среднюю величину зоны для контрольной концентрации на всех чашках (12Х3=36 зон).


«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина

Смотрите также на тему: