Приготовление рабочих растворов стандарта антибиотика и испытуемого материала



Для приготовления растворов стандарта антибиотика делают произвольную, но точную навеску на аналитических весах v Навеску растворяют в соответствующем растворителе (смотрите таблицу ниже) из расчета 1 мг в 1 мл или 1000 ЕД в 1 мл (основной раствор). Дальнейшие разведения готовят путем разведения основных растворов до нужных концентраций. Для улучшения условий диффузии антибиотиков в агар для разведения используют буферные растворы с определенным солевым составом и значением рН.

Растворы, применяемые для разведения стандартов и испытуемых образцов, условия приготовления и хранения растворов

Рабочий стандарт
антибиотика
Растворители для приготовления
растворов стандарта
и испытуемого материала2
Срок хранения основнго раствора стандарта при 4—10°С, дни Концентрации для построения стандартной кривой, мкг/мл Контролная концентрация стандарта, мкг/мл
основной раствор
(для стандарта)
испытуемый
раствор
1 2 3 4 5 6
Бензилпенициллина калиевая или натриевая соль 1 Буфер № 1 фосфатный 1/15 М (рН 6,8—7,0) калия фосфат однозамещенный — 3,63 г, натрия фосфат двузамещенный — 7,13 г, вода дистиллированная— до 1000 мл То же, что и для основного раствора 3 0,6 1
0,8
1,0
1,25
1,5
Феноксиметилпенициллин 1 То же То же 7 0,6 1
0,8
1,0
1,25
1,5
Ампициллина тригидрат Буфер № 1 Буфер № 2 цитратносолянокислый (рН 5,8— 6,0): натрия цитрат трех замещенный — 20,6 г, хлористоводородная кислота концентрированная — 1,81 мл, вода дистил. ванная — до 1000 мл 3 0,1 0,2
0,15
0,2
0,25
0,3
Оксациллина натриевая соль Буфер № 1 Буфер № 2 3 0,2 0,5
0,35
0,5
0,75
1,0
Метициллина натриевая соль То же То же 1 0,2 0,3
0,25
0,3
0,4
0,5
Диклоксациллина натриевая соль То же То же 1 0,05 0,1
0,075
0,1
0,125
0,15
Карбенициллина динатриевая соль То же То же 5 1,5 5
3
5
5,5
6
Цефалексин Буфер № 1 Буфер № 2 3 0,5 1
0,75
1,0
1,25
1,5
Цефалотин Буфер № 1 Буфер № 2 3 0,3 0,5
0,4
0,5
0,62
0,75
Тетрациклин, окситетрациклин, хлортетрациклин, доксициклин (в виде гидрохлорида) 0,01 н. раствор хлористоводородной кислоты То же 7 0,2 0,5
0,35
0,5
0,75 1,0
Метациклина гидрохлорид 2 мл диметилформамида на 10 мг навески, затем 0,01 н. раствор хлористоводородной кислоты до 1000 мкг/мл То же 7 0,2 0,3
0,25
0,3
0,4
0,5
Стрептомицина сульфат Буфер № 3 фосфатный 1/15 М (рН 6,0—6,2): калия фосфат однозамещенный — 7,72 г, натрия фосфат двузамещенный — 1,78 г, вода дистиллированная — до 1000 мл Буфер № 4 фосфатный 1/15 М (рН 7,8—8,0): калия фосфат однозамещенный — 0,68 г, натрия фос­фат двузамещенный — 10,99 г, вода дистиллированная — до 1000 мл 30 1,2 2
1,6
2,0
2,5
3,0
Эритромицина основание 1 мл этанола на 10 мг навески, затем буфер № 4 до 1 мг/мл Буфер № 4 фосфатный 1/15 М (рН 7,8—8,0): калия фосфат однозамещенный — 0,68 г, натрия фосфат двузамещенный — 10,99 г, вода дистиллированная — до 1000 мл 7 1,2 2,0
1,6
2,0
2,5
3,0
Олеандомицина фосфат Буфер № 3 Буфер № 4 7 2,4 4,0
3,2
4,0
5,0
6,0
Фузидина натриевая соль Буфер № 4 Буфер № 1 14 и более 0,01 4 0,05
0,03
0,05
0,075
0,1
Неомицина сульфат Буфер № 4 15% калия раствор хлорида 30 2,4 4,0
3,2
4,0
5,0
6,0
Канамицина сульфат Вода дистиллированная Буфер № 4 30 0,6 1,0
0,8
1,0
1,25
1,5
Гентамицина и сизомицина сульфат То же То же 14 0,5 1
0,75
1,0
1,25
1,5
Флоримицина сульфат То же То же 7 6,0 10
8,0
10,0
12,5
15,0
Линкомицина гидрохлорид Буфер № 4 Буфер № 4 30 0,5 1
0,75
1,0
1,25
1,5
Циклосерин Вода дистиллированная Буфер № 1 3 60,0 100
80,0
100,0
125,0
150,0
Рифампицин Диметилформамид из расчета 1 мл на 10 мг навески препарата, затем дистиллированная вода до получения концентрации 1000 мкг/мл Буфер № 3 4 0,02
0,025
0,03
0,035
0,045
0,03
Полимиксина В сульфат1 Фосфатный буфер (рН 6,0—6,2): калия фосфат однозамещенный — 8 г, калия фосфат двузамещенный — 2 г, вода дистиллированная—до 1000 мл Фосфатный буфер (рН 21 6,0—6,2): калия фосфат однозамещенный—150 г, калия фосфат двузамещенный — 70 г, вода дис­тиллированная — до 1000 мл 21 2 5
3
5
7
9
Нистатин Спирт 80% или диметилформамид (концентрация препарата 1 мг/мл) Буфер № 1 с содержанием 2—4 мкг/мл тетрациклина (к 1 л буфера добавляют 1—2 мл раствора тетрациклина с концентрацией 2000 мкг/мл) 3 30,0 50
40,0
50,0
60,0
80,0
Леворин Спирт 80% или диметилформамид (концентрация препарата 1 мг/мл) То же 5 30,0 50
40,0
50,0
60,0
80,0
  1. Концентрации — в ЕД/мл.
  2. Буферные растворы стерилизуют при 0,5 ати и 115—112° С в течение 30 мин.
  3. При образовании диаметров зон не менее 17 и более 21 допускаются увеличение или уменьшение контрольных концентраций антибиотиков и соответствующее изменение разведений исследуемых образцов.
  4. Фузидин связывается белками сыворотки крови на 90-95%, поэтому при определении его концентрации в сыворотке для разведенця испытуемых проб и приготовления стандартных растворов используют цельную человеческую сыворотку. Концентрации для построения стандартной кривой будут составлять соответственно: 0,25; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6.


«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина

Смотрите также на тему: