Значение разработки ускоренных методов определения концентраций в крови и тканях для антибиотиков группы аминогликозидов
Наибольшее значение разработка ускоренных методов определения концентраций в крови и тканях имеет для антибиотиков группы аминогликозидов. Вследствие незначительного разрыва между терапевтической и токсической концентрацией даже небольшое превышение пограничного уровня концентрации, который составляет для гентамицина и юбрамицина 6—8 мкг/мл, сизомицина — 4—6 мкг/мл, канамицина — 15— 20 мкг/мл, стрептомицина 25—30 мкг/мл, может сопровождаться побочными реакциями (ото- и нефротоксичность).
Применительно к новым аминогликозидам разработаны ускоренные методы определения их концентраций в крови и других биологических субстратах (микробиологический, энзиматический, радиоиммунный и др.), наибольшее практическое значение из которых имеет микробиологический метод, поскольку другие требуют малодоступных реагентов, сцинтилляционных счетчиков и др., что ограничивает их широкое применение.
При укорочении срока испытания до 3—4 вместо обычных 18—20 ч при использовании ускоренного микробиологического метода схема терапии аминогликозидами при превышении концентраций выше допустимых пределов может быть скорректирована в течение первого дня лечения до назначения второй дозы антибиотика.
Метод серийных разведений
Для определения содержания антибиотика в жидкостях организма (кровь, экссудаты полостей, ликвор и др.) можно использовать также метод последовательных разведений в жидкой среде.
Питательной средой в этом случае служит среда Гисса с глюкозой и реактивом Андреде (рН 7,2) или фенол-сывороточная среда (2 мл 10% раствора глюкозы, 2 мл сыворотки крови человека, 6 мл дистиллированной воды и 0,25 мл насыщенного раствора фенолового красного).
Среду заражают стандартизованной взвесью определенного для каждого антибиотика тест-микроба из расчета 1000—10 000 микробных клеток на 1 мл среды. Зараженную среду-разливают по 0,2 или 0,5 мл в стерильные пробирки. Для каждого образца готовят два ряда по 10 пробирок в каждом. Первый ряд служит для разведения раствора стандарта антибиотика (стандарт разводят до предполагаемой концентрации сывороткой человека или здорового животного), второй — для разведения испытуемого материала (например, сыворотки). Разведения (двукратные, последовательные) испытуемого раствора и стандартного образца производят в объеме 0,2 или 0,5 мл засеянной среды.
Контролями опыта служат незараженная (контроль прозрачности и стерильности) и зараженная соответствующим тест-микробом (контроль роста культуры) среды. Результаты учитывают после 16—18 ч инкубации при 37° С по изменению цвета (среда Гисса становится розовой, фенол-сывороточная— из красной при рН 7,2 становится желтой за счет сбраживания растущими микроорганизмами глюкозы и изменения рН) и помутнению среды.
Для того чтобы установить концентрацию антибиотиков в исследуемой сыворотке, умножают наибольшее разведение сыворотки, задерживающее рост тест-микроба (разведение в последней пробирке с прозрачной, не изменившей цвета средой), на наименьшую концентрацию стандарта антибиотика в пробирке с отсутствием роста. Полученная величина соответствует содержанию антибиотика в 1 мл исследуемой сыворотки.
В приведенном в таблице ниже примере раствор стандарта пенициллина задерживает рост тест-микроба в концентрации 0,025 ЕД/мл, а испытуемая сыворотка — в разведении 1:8.
Определение содержания пенициллина в сыворотке
Разведение сыворотки | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 |
Рост тест-микроба | — | — | — | + | + | + |
Концентрация стандарта пенициллина в среде, ЕД/мл | 0,2 | 0,1 | 0,05 | 0,025 | 0,0125 | 0,0063 |
Рост тест-микроба | — | — | — | — | + | + |
Условные обозначения: (+) — рост тест-микроба, (-) — отсутствие роста.
Содержание пенициллина в неразведенной сыворотке соответствует 0,025Х8=0,2 ЕД/мл.
«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина
- Определение концентрации антибиотика в испытуемом растворе
- Средняя величина зоны контрольной концентрации антибиотика
- Подбор раствора стандарта антибиотика
- Приготовление рабочих растворов стандарта антибиотика и испытуемого материала
- Установка посевной дозы тест-микроба
- Определение концентрации антибиотиков в тканях органов