Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам
Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существует ряд методов, среди которых наиболее распространены: метод последовательных разведений в жидкой питательной среде или питательном агаре, метод диффузии в агар (метод дисков, насыщенных антибиотиками) и ряд ускоренных методов.
Определение чувствительности микробов к антибиотикам in vitro проводится в условиях, значительно отличающихся от тех, в которых препарат действует в организме. На его результаты большое воздействие оказывают такие факторы, как состав и рН питательной среды, величина посевной дозы, возраст культуры, условия культивирования и др. При использовании метода диффузии в агар на результаты исследований влияют толщина слоя питательной среды, ее влажность, скорость диффузии антибиотиков, скорость роста исследуемых микроорганизмов и др. Метод диффузий в агар (метод бумажных дисков) наиболее прост и широко используется, однако является лишь качественным. Метод последовательных разведений антибиотика в питательной среде в стандартных условиях опыта является более надежным и точным количественным методом.
Метод серийных разведений
Показанием к определению чувствительности методом серийных разведений является необходимость получения количественных данных (преимущественно при тяжелом течении процессов) для проведения регулируемой антибиотикотерапии (разработка режимов введения).
Установление степени чувствительности к ряду антибактериальных препаратов микроба, вызывающего инфекционный процесс, влияет на выбор антибиотика (отказ от препаратов, характеризующихся относительно высокой токсичностью при умеренной чувствительности к ним возбудителя), его дозировку (концентрация антибиотика в крови в 2 — 3 раза должна превышать его МПК в отношении возбудителя) и режим введения. Количественное определение чувствительности необходимо также для определения бактерицидности избранного препарата (как гарантии быстрого терапевтического эффекта и безрецидивного течения) в отношении данного возбудителя.
Существуют две модификации метода — определение чувствительного микробов к антибиотикам на жидкой и на плотной питательных средах.
Метод дает возможность определить минимальную подавляющую рост концентрацию антибиотика (МПК) для выделенного штамма возбудителя. Он заключается в приготовлении ряда последовательных разведений антибиотиков в питательной среде с внесением во все разведения исследуемой культуры по подавлению роста микроба определенной концентрацией антибиотика в питательной среде судят о степени чувствительности микроорганизма.
«Рациональная антибиотикотерапия»,
С.М.Навашин, И.П.Фомина
Неудачи антибиотикотерапии могут быть обусловлены также неправильным выбором доз и методов введения препарата, поздним началом лечения, применением антибиотиков в заниженных дозах при комбинированной терапии, недостаточной продолжительностью лечения и т. д. Не всегда принимается также во внимание возможность инактивации антибиотиков ферментными системами организма, связывания белками крови и тканей, некротическими массами и др. Неудовлетворительные результаты лечения при…
К ускоренным методам определения чувствительности относится метод, с помощью которого обнаруживается образование инволюционных форм бактерий под действием антибиотика при фазово-контрастной микроскопии. Инволюционные формы микроорганизмов образуются в присутствии бактериостатических концентраций антибиотика. В отсутствие его при действии суббактериостатических концентраций, а также при устойчивости изучаемого штамма к препарату вырастают нормальные микроколонии. Морфологические изменения исследуемых культур под действием антибиотика…
В случае чувствительности к действию антибиотика штамма возбудителя не происходит сбраживания глюкозы при культивировании на среде, содержащей глюкозу, феноловый красный (в качестве индикатора) и определенные концентрации антибиотика. При этом среда окрашивается в фиолетовый цвет вследствие ее подщелачивания. Изменение красного цвета среды на желтый свидетельствует о расщеплении глюкозы с образованием кислоты в результате роста штамма, устойчивого…
В Англии до настоящего времени применяют предложенный Flemming метод канавки. Для определения чувствительности микробов к антибиотикам этим методом в чашке с агаром вырезают полоску для получения канавки, а затем засевают штрихом перпендикулярно к канавке испытуемые штаммы микробов. Канавка заполняется растопленным и охлажденным до 35—60°С агаром, содержащим определенные концентрации антибиотика. Благодаря диффузии антибиотика в питательную среду…
Отсутствие зоны задержки роста микроба вокруг диска свидетельствует о том, что испытуемый штамм нечувствителен к данному антибиотику; при зоне диаметром до 10 мм штамм расценивается как малочувствительный. Единичные колонии или тонкая пленка роста внутри зоны задержки роста не учитываются. Размер зон может меняться в зависимости от толщины слоя агара, густоты микробного газона, состава среды. Однако…
Для сокращения объема испытания следует использовать наборы дисков с учетом вида выделенного возбудителя и локализации инфекции (смотрите таблицу ниже). Основные наборы дисков с антибиотиками, рекомендуемые для определения чувствительности в зависимости от вида выделенной культуры и патологического материала Антибиотик, содержащийся в диске Предварительное испытание чувствительности микрофлоры патологического материала Испытание чувствительности чистой культуры гной моча мокрота Staphylococcus…
Для контроля точности и стандартности проведения исследований в каждом опыте необходимо использовать тест-культуры с известной чувствительностью к антибиотикам. ВОЗ рекомендует для этой цели три культуры Американской коллекции типовых культур: Escherichia coli (АТСС 25922), Staphylococcus aureus (АТСС 25923), Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853). При определении чувствительности выделенных возбудителей необходимо проводить контрольный анализ с измерением зон задержки роста…
Приготовление чашек Расплавленную агаризованную среду (бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120—140 мг% аминного азота — 1000 мл; агар-агар «тафуинский» —15 г, натрия фосфат двузамещенный — 3 г, рН после стерилизации 7,0—7,2) разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм, расположенные на горизонтальной поверхности. Перед заражением поверхность застывшей среды подсушивают в течение…
Из двух способов определения чувствительности микробов к антибиотикам (в жидкой и плотной среде) более точным является метод серий разведений в жидкой среде. Результаты, полученные при определении чувствительности в твердой питательной среде, менее постоянны. Метод разведений в агаре не следует применять для оценки чувствительности микробов, дающих тонкий, разреженный рост (стрептококки, пневмококки) или широко распространяющихся по поверхности…
В зависимости от величины посевной дозы значение МПК антибиотика может колебаться: при увеличении дозы чувствительность снижается за счет возрастания количества образуемой стафилококками пенициллиназы в среде. Пробирки инкубируют при 37° С в течение 18—24 ч. Результаты учитывают, определяя наличие или отсутствие роста микроба в среде, содержащей различные разведения антибиотика. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон)…
